Examens QCM / QROC de microbiologie

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m6 bcp

merci

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BRUCELLA

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F - DIAGNOSTIC

Si le diagnostic sérologique est le plus fréquent, seul le diagnostic bactériologique par culture et isolement de la souche apportera la certitude.

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE

Ne pas oublier d'indiquer au biologiste votre suspicion, s'il y a lieu

Prélèvements:
- Forme sudoro-algique : hémoculture (la bactériémie est continue)
- Forme focalisée: LCR, pus, liquide articulaire, ganglion...

Milieux : enrichis, à incuber à 37°C et sous C02 + (B.abortus) au moins 15 jours
L'usage de milieux liquides est habituel et la modalité de Castaneda (milieu biphasique) est inutile.

ATTENTION AUX RISQUES DE CONTAMINATION

Caractères de culture : Poussent pauvrement et lentement sur les milieux habituels tels milieux pour hémoculture ou gélose chocolat > 2 jours à 37°C
Certaines espèces et biotypes sont exigeantes en gaz carbonique (CO2)(B. abortus).
L'orientation diagnostique rapide, outre la culture lente et l'aspect des colonies, est fondée sur le caractère oxydase + et uréase + puis sur une agglutination rapide sur lame (antigène A ou M).

DIAGNOSTIC INDIRECT: SERODIAGNOSTIC-ALLERGIE

1 - Séroagglutination en tube (sérodiagnostic de Wright) cf WIDAL-FELIX, deux suspensions de germes avec A ou M prédominant sont utilisées.

Dès le 10e jour, les agglutinines apparaissent puis suivent une cinétique jusqu'au 5-6e mois. Intérêt dans la brucellose aiguë et sub-aiguë, agglutination complète au 1/80e, autre examen: 1 - 2 semaines plus tard.

Mauvaise spécificité : V. cholerae, Y. enterocolitica 09, tularémie

2 - Epreuve à l'antigène tamponné = test au rose Bengale ou épreuve à l'antigène tamponné (EAT, variante d'agglutination)

Interprétation similaire mais cinétique des anticorps plus longue que celle du sérodiagnostic de Wright

3 - Autres épreuves sérologiques si brucellose sub-aiguë et chronique: Immunofluorescence, test de Coombs, déviation ou fixation du complément.

4 - Intradermo-réaction à la mélitine (Burnet) : Cette épreuve d'hypersensibilité retardée est peu utilisée en l'absence actuelle d'allergène facilement disponible dans le commerce. La réaction est précoce (lecture après 24 h d'une réaction locale et quelquefois générale). Rechercher oedème, érythème, longue persistance de la positivité.

L'intérêt des tests diagnostiques varie en fonction de la forme de la maladie

CHLAMYDIA

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2 - Taxonomie et caractéristiques bactériologiques

La famille des Chlamydiaceae comprend 2 genres et 9 espèces.

- Le genre Chlamydia comprend 3 espèces dont une seule rencontrée chez l'homme, C. trachomatis.

C. trachomatis est divisée en biovars et sérovars responsables d'infections spécifiques.

- Le genre Chlamydophila regroupe 6 espèces. Deux sont rencontrées chez l'homme, C. pneumoniae et C. psittaci .
. C. pneumoniae est divisé en biovars, le biovar TWAR étant spécifiquement humain.
. C. psittaci comprend des souches variées isolées chez les oiseaux sauvages (perroquets) ou domestiques (perruches) et les volailles (canards, poulets).

Les Chlamydia existent sous deux formes caractéristiques (vues en microscopie électronique, Dr Mortemousque, Pr Gendre, Laboratoire de Microscopie électronique, Université de Bordeaux I):

- le corps élémentaire (CE), forme infectieuse, extracellulaire, incapable de multiplication

- le corps réticulé (CR), intracellulaire, non infectieux.



Le cycle de développement comprend plusieurs étapes :

1. Attachement et entrée du CE dans la cellule hôte

2. Différenciation du CE en CR

3. Multiplication du CR dans inclusion cytoplasmique

4. Différenciation des CR en CE

5. Sortie des CE par éclatement de la cellule

Dans certaines conditions, en particulier en présence de cytokines comme l'interféron, le cycle de développement est altéré. La bactérie persiste au sein de la cellule dans un état anormal. La bactérie ne peut plus se multiplier mais sa persistance contribuerait à l'installation d'une infection chronique responsable de séquelles caractéristiques, de diagnostic et de traitement difficile.

3.2 - Diagnostic biologique

Le diagnostic repose essentiellement sur la mise en évidence directe de la bactérie.
cf Techniques de prélèvement
Dans le cadre du diagnostic d'une infection génitale symptomatique

- Chez la femme, prélèvement endocervical sous spéculum à l'écouvillon déposé en milieu de transport
- Chez l'homme, prélèvement urétral à l'écouvillon déposé en milieu de transport ou 1er jet d'urine

La recherche de C.trachomatis s'inscrit dans une recherche globale d'autres microorganismes susceptibles de donner une infection génitale (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, mycoplasmes, Candida...)

Dans le cadre du diagnostic du dépistage des formes asymptomatiques chez les jeunes de moins de 25 ans sexuellement actifs (planning familial, médecine préventive, centre de dépistage anonyme et gratuit du Sida (CDAG) ….)
chez la femme, 1er jet d'urine ou écouvillonnage vulvo-vaginal
chez l'homme, 1er jet d'urine

De nombreuses techniques directes de détection sont disponibles et commercialisées, de type immunologique (exemple : IFD immunofluorescence directe d'un frottis cervical(cf photo) ou biologie moléculaire (PCR).

Seule la PCR a une sensibilité suffisante pour être utilisée dans toutes les circonstances (exemple d'automate à droite).

La culture cellulaire (photo d'inclusions intracellulaires ci-contre), rarement pratiquée, est la méthode de référence mais sa sensibilité est souvent en défaut.

La sérologie est une aide au diagnostic dans les formes compliquées telles infections génitales hautes à C. trachomatis et leurs complications, pneumopathies du nouveau-né ou encore LGV.

MYCOPLASMA

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2 - Caractères bactériologiques

Les mycoplasmes appartiennent à la classe des Mollicutes (de mollis cutis : peau molle).

Les espèces pathogènes pour l'homme appartiennent aux genres Mycoplasma et Ureaplasma. Ce sont des formes très évoluées ayant perdu, au cours de l'évolution, la capacité de synthétiser une paroi.

Ils sont polymorphes, non colorables par le Gram. M. pneumoniae et M. genitalium ont une extrémité effilée, structure spécialisée leur permettant d'adhérer aux cellules épithéliales.

M. pneumoniae en culture : SP, structure spécialisée par laquelle il adhère aux cellules épithéliales
Capables d'interactions étroites avec le système immunitaire de l'hôte, ils peuvent subir des variations antigéniques leur permettant d'échapper aux défenses de celui-ci. M. genitalium a le plus petit génome bactérien connu (580 kb).
Bactéries fragiles, ils sont cultivables en milieu acellulaire. Ils exigent des milieux complexes enrichis en sérum, souvent rendus sélectifs par la présence de pénicilline à laquelle ils sont insensibles. Difficiles à cultiver (M. pneumoniae et surtout M. genitalium), ils donnent de très petites colonies, visibles à la loupe binoculaire, ayant un aspect en œuf sur le plat.

Exemples de colonies: M. hominis (Mh), Ureaplasma (U)

L'identification se fait sur les propriétés métaboliques (fermentation du glucose, hydrolyse de l'arginine ou de l'urée) (cf Tableau ci-dessous).
Principaux caractères d'identification

principaux agents pathogénes responsables d’infections ostéo-articulaires selon les
circonstances étiologiques
Toxicomanie intraveineuses : Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, autres
bacilles à Gram négatif (BGN)
Drépanocytose : Salmonella sp., Haemophilus influenzae
Contact avec animal, produits laitiers crus : Brucella melitensis, Coxiella burnetii,
Pasteurella multocida (morsure)
En post-opératoire précoce : S. aureus, streptocoques, BGN dont P. aeruginosa
En post-opératoire tardif > 3 mois : staphylocoque à coagulase négative, S. aureus,
streptocoques, BGN dont P. aeruginosa
Porte d’entrée gynécologique ou urinaire : BGN dont P. aerugonisa, Enterococcus
faecalis
Infiltration articulaire : S. aureus, streptocoques, BGN
Diabète, artérite : S. aureus, BGN dont P. aerugonisa, anaérobies
Cathéter veineux, hémodialyse : S. aureus et staphylocoque à coagulase négative, BGN
Nouveau-né : S. aureus, S. agalactiae, entérobactéries
Enfant : S. aureus, H. influenzae (jusqu’à 3 ans), S. pygogenes
Spondylodiscite, infection chronique : Mycobacterium tuberculosis, mycobactéries
atypiques (M. xenopi), Brucella melitensis, Coxiella burnetii.

indication d'un ecbu

Niveau 1 : bactéries considérées pathogènes même en cas de bactériurie faible (≥ 103 UFC/ml)
- Escherichia coli
- Staphylococcus saprophyticus
■ Niveau 2 : bactéries souvent impliquées (notamment dans des infections nosocomiales)
- entérobactéries autres que E. coli
- Staphylococcus aureus
- Entérocoques
- Corynebacterium urealyticum
- Pseudomonas aeruginosa
■ Niveau 3 : bactéries dont l’implication est peu probable
- staphylocoques à coagulase négative autres que S. saprophyticus
- Streptococcus agalactiae
- Aerococcus urinae,
- Pseudomonaceae autres que P. aeruginosa
- Acinetobacter spp.
- Stenotrophomonas maltophilia
■ Niveau 4 : espèces appartenant aux flores uréthrales et génitales, à considérer en général comme
des contaminants (streptocoques a-hémolytiques, Gardnerella vaginalis, Lactobacillus spp., bacilles
corynéformes sauf C. urealyticum).
En cas d’interprétation douteuse en présence d’un tableau clinique évocateur, effectuer un ECBU de
contrôle réalisé dans des conditions d’asepsie strictes.

ECB lcr
http://www.scribd.com/doc/8909497/ecb-lcr
Identification des germes :

Elle est basée sur l’aspect macroscopique des colonies + Gram :
- C GN Neisseria meningitidis (grain de café) ;
- C GP Streptococcus pneumoniae (en flamme de bougie) ;
 Streptococcus β hémolytique grp B surtout chez le nouveau né (chaînette) ;
 Staphylococcus aureus (coagulase +)(grappe de raisin) ;
- BGN E. Coli de sérotype K1 ;
 Pseudomonas aeruginosa;
 Haemophilus influenzae;
- BGP Listeria monocytogenes ;
- Bactérie spiralée Treponema pallidum ;
 Leptospira interrogans

merci